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淋巴細胞分離液的原理及使用注意事項
發布時間:2020-10-28瀏覽:1673次
淋巴細胞分離液是一種根據細胞密度差異,借助離心產生的重力加速度,進行細胞的分離純化的常用試劑??捎糜隗w外分離外周淋巴血細胞,也可以從其他來源中分離單核細胞,包括臍帶血細胞和骨髓細胞,適用于從血液及組織勻漿中分離所需細胞,在醫療和醫學生物中廣泛應用。其他人及動物多種比重細胞分離液。
 
淋巴細胞分離液的原理:
 
外周血中單個核細胞和單核細胞,其體積、形態和密度與其他細胞不同.淋巴細胞分離液是一種密度介于1.075∽1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從而將各種血細胞加以分離。
 
淋巴細胞分離液使用時需要注意:
 
1.在正常大氣壓下,分離液、分離樣本以及分離環境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時呈較高密度,在高溫時呈較低密度。細胞分離液從冰箱取出后,不可立即使用,操作前可將樣本和分離液復溫至18-22℃。為獲得理想的實驗結果,在取血后2小時內進行實驗,血液提取后存放時間越長細胞活性越低。
2.實驗過程中,如需稀釋血液或洗滌細胞,不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養液,其成分會導致血細胞凝集,大大降低細胞得率及純度。
3.抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素,其他抗凝劑也可使用,但會影響細胞活性。應注意在血液稀釋過程中去除抗凝劑體積。
4.實驗操作時,不可使用含粉手套、不可使用內毒素含量過高的液體,手套中的粉末顆粒及高內毒素會激活淋巴細胞從而降低細胞得率及活性。
5.不可使用高聚合材質(如聚苯乙烯)的塑料制品,其帶有的靜電作用將導致細胞貼壁影響分離效果。推薦使用未經過堿處理的玻璃離心管。
6.吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數量增加。吸取過多的淋巴細胞層上層溶液會導致血漿蛋白及血小板混雜。
7.如需進行B、T細胞計數,則需血液貯藏時間不得多于10小時,否則將導致細胞被激活,得率降低。
8.為去除所混雜的血小板,可在分離液上層加上4-20%蔗糖梯度等滲溶液進行二次離心。
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