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淋巴細胞分離液分離原理和使用
發布時間:2021-09-10瀏覽:1295次
淋巴細胞分離液是一種根據細胞密度差異,借助離心產生的重力加速度,進行細胞的分離純化的常用試劑。常用的淋巴細胞分離液有Ficoll淋巴細胞分離液、Percoll淋巴細胞分離液。Ficoll與Percoll分離單個核細胞的方法均為密度梯度離心法。
 
分離原理:外周血中單個核細胞和單核細胞,其體積、形態和密度與其他細胞不同,淋巴細胞分離液是一種密度介于1.075~1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從而將各種血細胞加以分離。
 
淋巴細胞分離液的使用方法:
 
1、準備無菌的15ml離心管或錐形管; 
2、加入淋巴細胞分離液3ml;(注意:淋巴細胞分離液使用前需恢復室溫,18-25℃)
3、Hank~s液或PBS緩沖液1:1比列(如果全血樣本粘稠,可適當增大比例)稀釋抗凝過的全血樣品。
4、小心沿著壁管,接近分離液層面,非常緩慢地加入新鮮的稀釋過的全血樣品在淋巴細胞分離液上面;(切記不要攪渾淋巴細胞分離液)
5、小心放進離心機(水平轉子),4℃離心20-30分鐘,速度為400g-1000g;(注意:離心機剎車應取消,需等待自然停止)
6、小心取出離管,切記不要震動;
7、可見上層為淡紅色透明血漿,其次為薄薄的只密白色環,白色環衛單核細胞淋巴細胞。
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